細菌涂片及細菌染色是微生物學的基本技術(shù)，也是觀察細菌更簡單且行之有效的方法，是微生物檢測人員常用技能之一。通常情況下，由于細菌個體較小，較透明或半透明，如未經(jīng)染色往往不以觀察識別。因此借助于染色法可以使細菌著色，與視野背景形成鮮明對比，從而易于在顯微鏡下進行觀察。

微生物檢測常見的細菌染色方法包括簡單染色、負染色、革蘭氏染色、芽孢染色法、鞭毛染色、莢膜染色、死活染色。制備細菌染色片一般要經(jīng)過涂片、固定、染色、水洗、干燥等步驟，然后用微儀顯微鏡觀察。

1. 簡單染色：

在實驗室微生物檢測過程中，不同細菌或者由于觀察者所側(cè)重觀察的內(nèi)容不同，所以使用的染料也有差異，但是簡單細菌染色的方法是一樣的。

先按照上述的制片方法制片，制成需要觀察的玻片后，使用相對應的染料滴加到玻片上的菌膜區(qū)域，以覆蓋菌膜為準。按照不同染料的要求，結(jié)合所觀察的內(nèi)容確定染色時間，染色時間到達時，進行水洗，干燥等步驟。更后得到的玻片加蓋蓋玻片即可進行鏡檢。如有需要可以后續(xù)再進行油封、蠟封等封片過程。簡單細菌染色過程如下圖：

2. 負染色

制備觀察圖片是非常容易的，但是對微生物檢測初學者來說想要在玻片中找到目標菌還是有一定難度的，因為細菌常常無色透明且比較小，所以對初學者來說除非對光圈等進行很精細的調(diào)節(jié)，否則很難觀察到目標菌，因此進行負染色就十分重要。該方法是將微生物與苯胺黑或者墨水混合，再將混合物覆蓋于載玻片表面，由于這兩種天然黑色染料不能滲入微生物細胞，所以使得透明的微生物個體在黑色的背景下很容易觀察。負染色法常見有兩種操作方法。

**種發(fā)個方法比較常見，在一個載玻片上將微生物與異地苯胺黑混合，用另外的載玻片將混合物均勻的覆蓋于原來的載玻片上。該方法的目的是使混合物在在玻片上一邊厚一邊薄，在厚與薄中間的額區(qū)域就是更佳觀察區(qū)域。如圖所示：

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文章來源：環(huán)凱微生物