隨著檢測設備的提升、各種顯微技術的發(fā)展和標記手段的提高，如激光共聚焦顯微鏡在生物學研究中的廣泛應用，使得研究者能夠迅速、準確地觀察到蛋白質在細胞內的表達情況和定位。
通過顯微鏡觀察熒光標記細胞內的蛋白質和分子，為生物學的研究提供了更直觀的觀測手段。因此免疫熒光樣品的制備也成為生物學研究中的基本技術方法。
鑒于生物體內的復雜多樣性，制備免疫熒光樣品的方法也存在一些差異。本文主要介紹構建綠色熒光融合蛋白表達載體，并在培養(yǎng)細胞中表達綠色熒光融合蛋白及免疫熒光樣品的制備過程。
將構建好的熒光表達載體進行大量擴增，并通過質粒抽提試劑盒大量純化，得到不含有內毒素的純化質粒。將表達載體導入到培養(yǎng)細胞中后，經過培養(yǎng)即可進行熒光蛋白的檢測。而將基因導入哺乳動物培養(yǎng)細胞的方法有很多種，生化轉染法是很常用的導入培養(yǎng)細胞方法。
為了方便在激光共聚焦顯微鏡上觀察，免疫熒光樣品通常需要制備在載玻片上。培養(yǎng)的細胞需要在蓋玻片上貼壁生長。蓋玻片的厚度應小于0.17mm。購買到的蓋玻片需要用玻璃洗液浸泡處理一天以上，再用去離子水沖洗掉殘存的洗液。
蓋玻片經過高溫滅菌處理后，放置在細胞培養(yǎng)皿中，用于培養(yǎng)細胞。對于貼壁不牢的細胞，或者與細胞外基質相關的研究，玻璃片需預先包被細胞外基質，如poly-L-Lysine，F(xiàn)ibronectin，Laminin等。
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